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技術(shù)文章

液相色譜儀器使用小貼士

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 貯液瓶的日常維護(hù)
清潔是保持流動(dòng)相貯液瓶正常使用的關(guān)鍵,使用LCMS級(jí)的溶劑和試劑。陳舊的流動(dòng)相和用久了的試劑應(yīng)定期廢棄,防止生長(zhǎng)微生物和組分改變。貯液瓶?jī)?nèi)壁定期清洗,流動(dòng)相濾頭定期清洗或更換。
液相泵的日常維護(hù)
泵的密封圈是zui易磨損的部件,密封圈的損壞可能引發(fā)漏液或劇烈壓力波動(dòng);單向閥的正常工作至關(guān)重要,它若發(fā)生故障,將直接影響流速的穩(wěn)定性。
日常維護(hù)應(yīng)注意以下幾點(diǎn):
①使用LCMS級(jí)的溶劑和試劑;
②確保系統(tǒng)壓力在正常范圍;
③使用完緩沖液體系后用純水沖洗干凈,防止鹽沉積,系統(tǒng)不運(yùn)行時(shí)應(yīng)存儲(chǔ)在無(wú)緩沖液的溶液或有機(jī)溶劑中;
④密封圈按照各個(gè)生產(chǎn)廠商的建議定期更換。
進(jìn)樣器的日常維護(hù)
樣品預(yù)處理對(duì)于防止進(jìn)樣針和進(jìn)樣閥堵塞至關(guān)重要。
  預(yù)處理常用方法:
①超濾;
②溶劑萃取/去鹽;
③固相萃取;
④灌注凈化/去鹽;
⑤色譜分離;
⑥甲醇或乙腈沉淀蛋白;
⑦酸水解,酶解;
⑧衍生化。
  色譜柱的維護(hù)和保存
①每次工作結(jié)束,用高比例強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,沖去留在柱上的強(qiáng)吸附組分;
②凈化樣品,樣品中的微粒會(huì)進(jìn)入色譜柱,在柱頭上沉積下來(lái),造成柱壓升高,柱效降低;
③避免撞擊色譜柱,如掉落或超聲震蕩;
④柱壓避免急劇變化;
⑤反相柱C18應(yīng)保存在純有機(jī)相或50%有機(jī)相中,一周不用要卸下,兩端用堵頭密封,避免干枯。
流動(dòng)相的選擇
LCMS常用的流動(dòng)相為甲醇、乙腈、水和它們不同比例的混合物以及一些易揮發(fā)鹽的緩沖液,如甲酸銨、乙酸銨等,還可以加入易揮發(fā)酸堿如甲酸、乙酸或氨水等調(diào)節(jié)pH值;LCMS體系要避免使用含磷或氯的緩沖液,含鈉和鉀的成分必須<1mmol/l。(鹽分太高會(huì)抑制離子源的信號(hào)和堵塞噴霧針及污染接口)含甲酸(或乙酸)<2%,含三氟乙酸<0.5%,含三乙胺<1%,含醋酸銨<10—5 mmol/l。
樣品的預(yù)處理
從保護(hù)儀器角度出發(fā),防止固體小顆粒堵塞進(jìn)樣管道和噴霧針,防止污染MS,降低分析背景,排除對(duì)分析結(jié)果的干擾;從ESI電離得過(guò)程分析看,電荷聚集在液滴的表面,樣品和雜質(zhì)在液滴表面相互競(jìng)爭(zhēng),不揮發(fā)物(如磷酸鹽等)妨礙帶電液滴揮發(fā),大量雜質(zhì)妨礙帶電樣品離子氣化,增加電荷中和的可能。
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